離心超濾管

英文名稱 ：Amicon Ultra-15ml，10kDa Centrifugal Filter Unit該系列超濾管采用垂直結構的膜減少濃差極化，加快了離心速度,大大了離心所需的時間，整個離心操作大概10-30分鐘。倒轉離心回濃縮后的樣品保證極高的回收率(>90%的高回收率)，濃縮倍數(shù)可達25～30倍。內置低吸附的Ultracel-PL超濾膜，分別有3KD、10KD、30KD、50KD、100KD五種截留規(guī)格，是蛋白質溶液、細胞裂解液、組織培養(yǎng)液等生物樣品濃縮、脫鹽和緩沖液更換的理想選擇。廣泛應用于蛋白、抗原、抗體、酶、病毒和微生物等稀溶液或純化后的蛋白質（如層析洗脫液）的濃縮、脫鹽與純化。

技術指標：

①最大起始樣品處理量：15ml(吊籃轉子)、12ML（35°固定角度轉子），典型濃縮后終體積為200ul； 

②內置超濾膜為Ultracel-PL再生纖維素超濾膜；

③適合50ML離心機轉子； 

④最大離心力：吊籃式轉子為4000×g；35°固定角度轉子5000×g；

⑤尺寸：有效膜面積為7.6cm2，直徑為35mm，長度為121mm；

⑥管壁上標有截留規(guī)格。

超濾管大小規(guī)格選擇注意事項：

若實驗需要截留住目標蛋白，Millipore公司建議選擇比目標蛋白大小至少小2-3倍再生纖維素超濾膜材質的超濾管。如果是聚醚砜超濾膜材質超濾管，則所選擇超濾管規(guī)格大小比目標蛋白至少小4-5倍。

超濾管使用方法和注意事項

         蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。以下是個人總結的使用方法和注意事項。

        1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）。到底選擇多大截留分子量比較合適呢？10kDa、 5kDa、還是30kDa？通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾 管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同，表格中有。

        2、新買來的超濾是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂?shù)陌拙€為準。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。

        3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后，有所不同。具體可參閱附件里的說明書。離心機的加速度調至最低檔，減小對膜的壓力。注意，一定要等離心機達到目的轉速之后，方可離開離心機，否則離心機出問題時，無法第一時間處理，后果不可預測！膜與轉軸的方向根據(jù)說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。

        4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導致堵管。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。

        5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.22um超濾膜超濾），再 濃縮至1ml左右，連續(xù)三次，最后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍 左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。

        6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然后吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最后加入MilliQ水到超濾管中，沒過 超濾膜，防止膜失水變干。

超濾管[0.5ml 3KD]	Millipore	UFC500396		個
超濾管[0.5ml 10KD]	Millipore	UFC501096		個
超濾管[0.5ml 30KD]	Millipore	UFC503096		個
超濾管[0.5ml 50KD]	Millipore	UFC505096		個
超濾管[0.5ml 100KD]	Millipore	UFC510096		個
超濾管[4.0ml 3KD]	Millipore	UFC800396		個
超濾管[4.0ml 10KD]	Millipore	UFC801096		個
超濾管[4.0ml 30KD]	Millipore	UFC803096		個
超濾管[4.0ml 50KD]	Millipore	UFC805096		個
超濾管[4.0ml 100KD]	Millipore	UFC810096		個
超濾管[15ml 3KD]	Millipore	UFC900396		個
超濾管[15ml 10KD]	Millipore	UFC901096		個
超濾管[15ml 30KD]	Millipore	UFC903096		個
超濾管[15ml 50KD]	Millipore	UFC905096		個
超濾管[15ml 100KD]	Millipore	UFC910096		個