上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售鴨瘟PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應的分子生物學試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢價格，歡迎新老客戶咨詢認購。

產(chǎn)品詳細信息

名稱：鴨瘟PCR診斷試劑盒

規(guī)格： 20T/50T

品牌：上海滬崢

【用途】 用于鴨瘟的檢測、診斷和流行病學調(diào)查。

【操作步驟】

1.RNA提取 

 1. 病料處理

   取適量肝、腦、脾、法氏囊等病料組織，于滅菌研缽充分研磨，用PBS液按照1：3稀釋成均勻乳劑，-20℃反復凍融3次以上。

2. DNA的提取

(1) 取已凍融好的病料，1000rpm離心5min，取上清200μl（或質(zhì)控樣品T，200μl），加25μl TU-1和3μl TU-2，50℃水浴1～2h，期間輕柔振蕩幾次幫助裂解。

（2）加入200μl SR-I，劇烈顛倒輕搖充分混勻，70℃放置10min。

（3）冷卻后加入100μl異丙醇，充分混勻后，加入一個吸附柱（試劑盒內(nèi)提供）中（吸附柱放入收集管中）10000rpm離心30秒，棄掉收集管中的廢液。

（4）加入500μl SR-Ⅱ，10000rpm離心30秒，棄廢液。

（5）加入700μl SR-Ⅲ，10000rpm離心30秒，棄廢液。

（6）再加入500μl SR-Ⅲ，10000rpm離心30秒，棄廢液。

（7）將吸附柱放回空收集管，13000rpm離心2min。

（8）取出吸附柱，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加入70μl TU-3（使用前事先預熱至65-70℃，有助于提高洗脫效果），室溫放置3～5min，12000rpm離心1min，將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心1min。

（9）洗脫液即為模板，可放在2～8℃，如果要長時間存放，可以放置在-20℃。

 3 .PCR操作 

4.電泳：

    配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產(chǎn)物5uL混合1μl TU-7，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加3μl TU-8，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結(jié)果。

【結(jié)果判定】

    在380bp 位置出現(xiàn)擴增帶，實驗結(jié)果為陽性

鴨瘟PCR診斷試劑盒

【注意事項】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。

2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫擱置太久。

3. 盡量建立PCR試驗操作區(qū)，避免交叉污染。

4. 加樣和反應程序嚴格按照說明書進行，由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結(jié)果情況，不予負責。

5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內(nèi)壁，可用鑷子夾取。

6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。

傳統(tǒng)PCR對基因的檢測只能定性，不能定量主要是由擴增產(chǎn)物積累的動力學所決定的：①PCR產(chǎn)物在擴增過程中呈指數(shù)積累，當產(chǎn)物增加到一定程度，產(chǎn)物就停止了指數(shù)積累。不同起始模板，其指數(shù)增長期所用的循環(huán)是不同的，因此，不同數(shù)量基因的樣品在同一循環(huán)次數(shù)中積累的產(chǎn)物不能作為樣品基因定量的依據(jù)；②PCR產(chǎn)物積累到一定程度就不能再增加，再進入平臺期。為了擴大PCR檢出的靈敏度通常要增加循環(huán)次數(shù)，循環(huán)次數(shù)增加使得樣品目的基因含量高的反應管已進入平臺期，終產(chǎn)物量并不代表樣品目的基因含量；③PCR反應的管間擴增效率差異總是存在的，既然PCR產(chǎn)物呈指數(shù)增長，由擴增效率差異引起的產(chǎn)物擴增差異也呈指數(shù)積累，增加循環(huán)次數(shù)勢必增加終產(chǎn)物的差異，而減少循環(huán)次數(shù)又降低了檢測的靈敏度。FQ-PCR采用實時檢測，使所有含有不同數(shù)量的目的基因均在同一條件（達到熒光閾值）下進行分析，因而更具有可比性。而且，這一條件處于擴增產(chǎn)物指數(shù)積累初期，合成產(chǎn)物所需的dNTP、酶、離子均處于飽和的*狀態(tài)，所以FQ-PCR循環(huán)參數(shù)與起始模板間有良好的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)＞0.95），實現(xiàn)了極為精確的基因定量檢測。