Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8），是一種基于WST-8而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。 

CCK-8試劑中含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）是一種類似于MTT的化合物，它在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）存在條件下，可以被線粒體內的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產(chǎn)物Formazan （參考圖1），生成的Formazan數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析，細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。

保存條件：4℃避光保存，一年有效。-20℃可以儲藏兩年，但反復凍融會增加背景值，干擾實驗測定，因此請將經(jīng)常使用的試劑保存在4 ℃。 

操作事項：請參閱說明書

產(chǎn)品優(yōu)勢 

靈敏度高，線性范圍寬，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好

操作簡便，省時省力

水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞

無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低

為1瓶溶液，毋需預制，即開即用

適合于高通量藥物篩選

檢測效果與國外品牌相媲美

注意事項

建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。

 CCK-8 反應時間的確定：一般情況下，白細胞顯色比較困難，因此需要增加細胞數(shù)量和延長 CCK-8 反應時間。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難顯色，因此懸浮細胞在加入 CCK-8 培養(yǎng)0.5-4小時后，可先從培養(yǎng)箱取出，目測或用酶標儀測定顯色程度，若顯色困難可以繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時后再確定。對于貼壁細胞，CCK-8 的培養(yǎng)時間一般為 0.5-4 小時，在培養(yǎng) 20 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度。

每孔接種細胞數(shù)：當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔 (100 μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500個/孔 (100 μl培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。

設定空白對照：在不含細胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗（細胞毒性實驗）時，還應考慮藥物的吸收，可在加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。

影響CCK-8測定的物質：由于CCK-8檢測細胞活性的原理是通過檢測活細胞脫氫酶催化的反應，所以如果待測體系中存在氧化還原物質則可能會干擾檢測結果，還原性物質會使吸光度增加，氧化性物質會使吸光度減小，因此應需設法去除這些物質的影響。酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響，培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除只含有培養(yǎng)基的對照孔中本底吸光度而消除，因此不會對檢測結果造成影響。

測定波長：如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，建議采用雙波長進行測定，檢測波長450nm，參比波長600-650nm。如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片，但是450nm檢測靈敏度*。

當在培養(yǎng)箱內培養(yǎng)時，培養(yǎng)板最外一圈的孔最容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，最外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。

如果細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應洗滌細胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測。

為了您的安全和健康，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。