德國ibidi-μ-Slide-ibiPore-SiN:可視化的transwell細胞侵襲
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一款具有多孔氮化硅膜的μ-Slide載玻片,可用于實時觀察流動或靜態(tài)條件下的細胞侵襲、遷移以及細胞相互作用的可視化的“ transwell ”
產品特點:
* 透過薄而多孔的薄膜獲得卓越的光學性能
* 有著廣泛的應用,細胞可完全粘附到頂部-基底
* 對于不同細胞類型有多種孔徑大小可以選擇
應用:
1. 流動狀態(tài)下跨內皮細胞遷移
2. 2D或3D凝膠內細胞層的共培養(yǎng)和傳輸分析
3. 頂部-基底細胞極性分析
4. 頂部-基底梯度的細胞屏障模型分析
5. 細胞遷移分析(例如,用于研究腫瘤侵襲或轉移)
在μ-Slide ibiPore IV型膠原涂層3μm孔徑中人類內皮細胞的免疫熒光染色,相位對比度、DAPI(藍色)、VE鈣粘蛋白(綠色)和F肌動蛋白(紅色)的疊加圖像。
技術特點:
1.SiMPore的微孔氮化硅膜
2.中間具有多孔光學膜的跨通道結構
3.優(yōu)異的光學性能,堪比蓋玻片
4.孔徑大小0.5μm,3μm,5μm,8μm供選擇
5.中間膜0.4μm(400 nm)
6.使用工作距離>0.5mm的物鏡
7.與ibidi泵系統(流體剪切力系統)完全兼容
8.下部通道中明確的剪切力和剪切速率范圍(更多詳情請參見“應用“欄中的《 AN11_Shear_stress》)
μ-Slide ibiPore SiN 工作原理
μ-Slide ibiPore SiN由插入兩個通道之間的水平多孔膜組成。上部通道是膜上方的靜態(tài)儲液池。下部通道是灌注通道,用于對附著在膜上的細胞施加限定的剪切應力。上部通道和下部通道僅通過隔膜彼此連通。
多孔膜由氮化硅(SiN)制成,這種材料具有非常高的化學和機械穩(wěn)健性。400nm厚的氮化硅膜非常適合成像和顯微鏡觀察,沒有任何自發(fā)熒光或透明度問題(如玻璃)。SiN材料可以直接用于貼壁細胞培養(yǎng),也可以選擇用ECM蛋白包被。
應用建議:孔徑 & 孔密度
什么是孔密度
孔密度是指膜的空隙體積分數。是孔隙的體積除以膜的總體積。下面的圖形為采用相同的放大倍數。
不同應用的建議孔徑:
Intended Use 經證實的應用:
這些應用已由ibidi研發(fā)團隊或者我們的用戶進行過試驗。
Endothelial Barrier Assays 內皮屏障分析
在膜的一側培養(yǎng)細胞單層。細胞可以在靜止或者流動剪切力條件下培養(yǎng)。
Co-Culture and Cell Barrier Assays 共培養(yǎng)和細胞屏障分析
在膜的兩側分別培養(yǎng)單層細胞。通過這種方法可以進行信號傳遞、共培養(yǎng)以及遷移實驗(例如,分析藥物通過上皮或內皮屏障的傳遞)。
Apical-Basal Cell Polarity Assays 頂端-基底端細胞極性分析
3D凝膠基質中的化學因子可以導向在膜另一側培養(yǎng)的單層細胞的極性發(fā)生。
Potential Use 潛在應用:
Trans-Membrane Migration in 2D/2D 跨膜遷移
在膜的一側培養(yǎng)單層細胞。可以觀察懸浮的白細胞在流動狀態(tài)下的滾動、粘附以及侵襲情況。
Cell Transport in a 3D Gel Matrix 細胞在3D凝膠基質中的傳遞
3D凝膠基質中的細胞遷移:在流動狀態(tài)下,觀察白細胞的滾動、粘附以及向3D凝膠基質中腫瘤細胞方向的遷移情況。
Application Examples 應用實例
MDCK和NIH-3T3細胞的相差顯微鏡觀察
Madin-Darby犬腎(MDCK,左)和NIH-3T3(右)細胞在μ-Slide ibiPore SiN,孔徑0.5μm的玻片中,無蛋白質包被。接種后,將細胞在靜態(tài)條件下在培養(yǎng)箱中保持20小時。相差顯微鏡,4倍物鏡。請注意,這張圖像中的中心多孔區(qū)域看起來更暗,因為0.5μm的孔隙無法用低分辨率物鏡分辨。
流動條件下HUVECS的相差顯微觀察
人臍靜脈上皮細胞(HUVEC)在μ-Slide ibiPore SiN中,孔徑3μm的玻片中,有纖連蛋白包被。將細胞接種并在具有ibidi泵系統/流體剪切力系統的流動條件(10達因/cm2)下在培養(yǎng)箱中保持12小時。固定后的相位對比顯微鏡,10倍物鏡。
流動下HUVECs F肌動蛋白細胞骨架的熒光顯微鏡觀察
人臍靜脈上皮細胞(HUVEC)在μ-Slide ibiPore SiN,孔徑5μm玻片中的免疫熒光染色,有纖連蛋白包被。將細胞接種并在具有ibidi泵系統/流體剪切力系統的流動條件(10達因/cm2)下在培養(yǎng)箱中保持12小時。綠色:肌動蛋白(鬼筆肽),藍色:細胞核(DAPI)。熒光顯微鏡,20倍物鏡。
選擇指南:ibidi 跨膜分析實驗解決方案
μ-Slide I Luer 3D | μ-Slide ibiPore SiN | |
玻片原理 | ||
界面原理 | 基于凝膠的 | 基于膜的 |
細胞基質 | 軟水凝膠(如膠原蛋白或基質凝膠) | 不同孔徑的硬質膜 |
顯微成像 | 受到凝膠光學的限制 | 沒有限制 |
流體應用 | 通道中明確的剪切力 | 下部通道中明確的剪切力 |
應用 |
|
|
屏障功能 | 是 | 是 |
遷移 | 是 | 是 |
細胞極化 | 是 | 是 |
剪應力 | 是 | 是 |
參考文獻:
Salvermoser, Melanie, et al. "Myosin 1f is specifically required for neutrophil migration in 3D environments during acute inflammation." Blood, The Journal of the American Society of Hematology 131.17 (2018): 1887-1898. 10.1182/blood-2017-10-811851
Rohwedder, Ina, et al. "Src family kinase-mediated vesicle trafficking is critical for neutrophil basement membrane penetration." Haematologica (2019). 10.3324/haematol.2019.225722
Non-Recommended Applications 不建議的應用
因技術原因,本產品不適用于以下應用,應避免使用.
本產品不適用于:
1.上通道灌注
2.兩個通道的灌注
3.跨膜流動
4.篩選應用