【檢測原理】
利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀 單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進行鏈置換擴增反應，實現(xiàn)在恒溫條件下(60~65°C)進行連 續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結(jié)果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結(jié)果。

【產(chǎn)品特點】

1. 快速簡便:將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少

   溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在 1 h 內(nèi)完成;

2. 特異性高:利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物，擴增反應的高度特異性;

3. 靈敏度高:檢驗限達到 10 CFU/Test;

4. 判讀簡單:反應前加入顯色指示劑，反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測

   儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果，直觀方便，且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。

   
   

   【儲存條件與保質(zhì)期】 2~8°C條件下儲存，有效期為 12 個月
   

【適用儀器】
1. PCR 儀器或金屬浴恒溫器。

2. 高速離心機，用于樣品前處理。

【樣品類型】
增菌液、可疑菌落樣品以及 DNA 樣品等。

【使用指南】

1. 樣品前處理
A. 樣品增菌液模板 DNA 的制備:

1. a)  取取 25 g 待檢樣品置于 225 mL PDB 增菌肉湯中，36 °C±1 °C增菌 8~12 h。該步驟也可依 照實驗室自行建立的方法進行增菌。

2. b)  取以上增菌液 1 mL 到 1.5 mL 規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min 離心 5 min，完全去除上清;

3. c)  加入 30 μL 裂解液充分懸浮管底沉淀，輕彈管壁氣泡，99°C加熱 10 min。

4. d)  12000 r/min 離心 15 min，上清即為待測樣品 DNA，靜置冰上，長時間不用應再次離心。

B. 可疑菌落模板 DNA 的制備:

挑取可疑菌落半環(huán)到含 30 μL 裂解液的無菌離心管，充分懸浮后按照上述步驟 c)、d)操作。 2. 試劑混合、加樣
A. 陰、陽性對照復溶

使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20°C存

儲待用。

B. 干粉試劑復溶、加樣

1. 1)  取出凍干粉試劑，按照需求剪取 n 個檢測試劑管(n=待檢測樣品數(shù)+1 管陽性對照+1 管陰性

   對照)，每管加入復溶液 20 μL;

2. 2)  向上述已加入復溶液的 n 個反應管中各加入顯色指示劑 2.5 μL;

3. 3)  向上述 n 個反應管中依次分別加入陰性對照、待測樣品 DNA、陽性對照各 2.5 μL，每個加

   樣后立刻蓋緊蓋子。

3. 擴增反應
   使用能夠提供恒溫條件的儀器(有熱蓋功能優(yōu)先)，設置溫度到 64°C，放入檢測管恒溫反應 50 min。

4. 結(jié)果判讀 反應結(jié)束后在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察，陰性對照檢測管呈 淡橙色，陽性對照檢測管呈熒光綠，待測樣品反應管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反 應管任一結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測結(jié)果無效，應重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。

【注意事項】

1. 檢測空間應嚴格分區(qū)操作，在空間條件允許情況下，試劑配置區(qū)用于配置反應所需要的所有試劑;樣品前處理區(qū)用于待測樣品的核酸提取和模板的加入;擴增觀察區(qū)用于反應進行 和結(jié)果判讀。各區(qū)內(nèi)空間獨立，試驗用品專用，避免交叉污染。另外，樣品處理區(qū)建議配 備超凈工作臺，并且所有步驟嚴格按照說明書的要求進行。

2. 檢測過程中建議穿潔凈工作服，帶一次性手套，使用的槍頭需提前。

3. 干粉檢測試劑在使用前低速離心，確保所有的干粉沉在管底，加入復溶液后盡量避免產(chǎn)生氣泡，反應前檢查反應管是否蓋緊，避免泄露造成污染。

4. 陽性對照可能會作為污染源，污染其他試劑和待檢樣品，導致出現(xiàn)假陽性結(jié)果，在加樣過 程中建議加入陽性對照反應管。

5. 使用顯色指示劑時，在反應結(jié)束后切忌開蓋，以防氣溶膠污染。

6. 本試劑盒僅用于食品和環(huán)境中樣品的檢測。

7. 本試劑盒是基于核酸的分子檢測，因此并非只能檢出唐菖蒲伯克霍爾德氏菌的活菌，判定結(jié)果有時會與傳統(tǒng)培養(yǎng)法不同，如需辨明活菌樣品存在，請用傳統(tǒng)微生物檢驗方法進行確

   證。

8. 試劑盒中反應管材質(zhì)為聚丙烯，包裝盒材質(zhì)是紙，使用完畢廢棄時按照廢棄物相關(guān)規(guī)定處理，由使用者自行負責處理。

9. 不同批號的產(chǎn)品請勿混合使用，請在有效期內(nèi)使用試劑盒，由于操作不當引起的誤判及有此誤判引發(fā)的其他事項，本公司概不負責。

   
   

   編號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	單位
   KJD16L	唐菖蒲伯克霍爾德氏菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24測試/盒	盒
   KJD01L	銅綠假單胞菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD02L	糞鏈球菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD03L	產(chǎn)氣莢膜梭菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD04L	金黃色葡萄球菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD05L	沙門氏菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD06L	志賀氏菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD07L	單核增生李斯特菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD08L	副溶血弧菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD09L	大腸桿菌O157：H7快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD10L	阪崎腸桿菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD11L	小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD12L	布氏桿菌(牛\豬\羊)核酸檢測試劑（恒溫熒光法）	24測試/盒	盒
   KJD13L	溶藻弧菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒
   KJD14L	創(chuàng)傷弧菌快速檢測試劑盒（恒溫熒光法）	24tests	盒

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   產(chǎn)品聲明: 

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