描述：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶又稱谷草轉(zhuǎn)氨酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶，英文名稱 Aspartate transaminase（簡稱AST）; aspartate aminotransferase（簡稱：AspAT/ASAT/AAT）; serum glutamic oxaloacetic transaminase(簡稱SGOT或GOT) 。在機體中以心肌含量最為豐富，其他組織如：肝臟、肌肉、腎、肺也含有此酶。急性心肌梗塞、急性肺炎、極大手術(shù)后此酶的活性明顯升高。另外，在肝、腎、肺、心、胸膜等臟器發(fā)生炎性病變時都可見此酶活性中度或輕度的升高。試劑盒可以測定血清、血漿等樣本中谷草轉(zhuǎn)氨酶活性。

原理： 試劑盒采用賴氏法進行AST活性檢測。谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）能催化天門冬氨酸和α-酮戊二酸生成草酰乙酸，草酰乙酸脫羧形成丙酮酸，其可與顯色劑（2，4-二硝基苯肼）作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性條件下呈棕紅色，顏色深淺可以反映酶活性高低。

適應范圍： 本試劑盒可以檢測組織或培養(yǎng)細胞中的谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性。

組成： （105次）

儲存：以上組分按要求保存，6個月有效。

操作步驟：

一. 樣品準備：

1、動物用生理鹽水(0.9% NaCl，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照100mg組織加入500ul-1000ul，4 ℃或冰浴預冷組織細胞裂解液,使用玻璃勻漿器或電動勻漿器等4 ℃或冰浴勻漿。隨后4 ℃ 12000rpm離心5min，取上清，部分進行蛋白定量（普利萊BCA法蛋白定量試劑盒P1511）。

2、收集細胞，按照每10⁷個細胞加入500ul-1000ul，4 ℃或冰浴預冷組織細胞裂解液,使用玻璃勻漿器或電動勻漿器等4 ℃或冰浴勻漿。隨后4 ℃ 12000rpm離心5min，取上清，部分進行蛋白定量（普利萊BCA法蛋白定量試劑盒P1511）。

二.酶活力測定：

1. 丙酮酸標準品工作液的配制：按下表用底物緩沖液和PB緩沖液將丙酮酸標準品稀釋成0、1.1ug、2.2ug、3.3ug、4.4ug、5.5ug七個濃度，充分混勻。丙酮酸0濃度孔只加底物緩沖液和PB緩沖液，以此作為空白孔調(diào)零，按照下述操作步驟操作，而后在520nm處讀吸光度OD值，繪制標準曲線。

使用分光光度計測定，丙酮酸標準品工作液稀釋比例：

使用酶標儀測定，丙酮酸標準品工作液稀釋比例：

2. AST活性測定：

   參照下表使用分光光度計進行操作。

使用酶標儀測定反應體系：

三、AST酶活力計算：

以丙酮酸微克數(shù)為x軸，測得的吸光度OD值為y軸，繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線計算樣本對應的丙酮酸質(zhì)量，然后根據(jù)AST酶活力單位計算公式，計算AST酶活性，建議以蛋白濃度進行校正。

酶標儀測定，AST酶活力：

未稀釋樣本AST酶活力 =（樣本管丙酮酸微克數(shù)-樣本對照管丙酮酸微克數(shù)）×250/2.5

稀釋樣本AST酶活力=（樣本管丙酮酸微克數(shù)-樣本對照管丙酮酸微克數(shù)）×稀釋倍數(shù)×250/2.5

分光光度計測定時，AST酶活力：

未稀釋樣本AST酶活力 =（樣本管丙酮酸微克數(shù)-樣本對照管丙酮酸微克數(shù)）×100/2.5

稀釋樣本AST酶活力=（樣本管丙酮酸微克數(shù)-樣本對照管丙酮酸微克數(shù)）×稀釋倍數(shù)×100/2.5

AST酶活力單位定義：每毫升樣本在37℃與底物作用30min后，能產(chǎn)生2.5ug的丙酮酸為一個丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力單位。

說明：

1、谷草轉(zhuǎn)氨酶的正常參考值為0～50U。

2、標準曲線上數(shù)值在20～100U是準確可靠的，超過200 U 時，需將樣品稀釋。

3、溶血標本不宜使用，因血細胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶活力較高，會影響測定結(jié)果。