一、產(chǎn)品應(yīng)用

      ND-2000是目前國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室中使用1為廣泛的一款微量分光光度計(jì)，其優(yōu)越的性能、準(zhǔn)確的結(jié)果贏得了廣大用戶的好評。

      該產(chǎn)品可用于以下幾個(gè)方面：

* 紫外檢測：常規(guī)紫外光波長下檢測樣品吸光值；

* 核酸檢測：可檢測dsDNA、ssDNA、RNA等不同類型核酸的濃度及其在260nm、280nm處的吸光值；

* 探針檢測：檢測熒光標(biāo)記探針的吸光值，可用于去除未能標(biāo)記探針的樣品；

* 細(xì)胞培養(yǎng)物檢測：檢測細(xì)胞培養(yǎng)物在600nm處的吸光值；

* 蛋白檢測：檢測普通純化后蛋白的濃度和280nm處的吸光值；

* 蛋白標(biāo)記檢測：可檢測被BCA、Bradford或Lowry標(biāo)定的蛋白樣品，自動(dòng)畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算出待測蛋白質(zhì)濃度。

 

二、 產(chǎn)品簡介
     NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)是NanoDrop的1新產(chǎn)品，應(yīng)用液體的表面張力特性，樣品體積只需要 0.5~2ul，在檢測臺上，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細(xì)管等耗材檢測吸收值的優(yōu)點(diǎn)。此產(chǎn)品設(shè)計(jì)受保護(hù)，并在全1廣受歡迎，其準(zhǔn)確度與便利性讓1家得以更進(jìn)行各項(xiàng)研究。

      NanoDrop 2000使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光譜檢測，且不需要暖機(jī)，開機(jī)后立即使用。搭配高感度CCD array檢測器，檢測吸收值可高達(dá)300Abs（dsDNA濃度2~15000ng/ul），大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測。

       待測樣品的均質(zhì)性是NanoDrop 2000的1高要求，一般核酸、蛋白質(zhì)樣品能在檢測前以vortex mixer震勻?yàn)?佳，若無vortex mixer也應(yīng)以pipette吸放數(shù)次混勻。若擔(dān)心genomic DNA可能因前述動(dòng)作而斷裂，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現(xiàn)均勻狀態(tài)，以確保 2ul 具有代表性。

      檢測時(shí)選擇不同檢測模式，可以得到1快速的結(jié)果：
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。

● UV-Vis – 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現(xiàn)）。

● A280蛋白質(zhì)定量法 – 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì)，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（mass extinction coefficient）方可計(jì)算。

● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結(jié)果，自動(dòng)畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算R square，待測蛋白質(zhì)濃度。

* 蛋白質(zhì)檢測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑，因呈色劑隨時(shí)間會逐漸加深，使用前請?jiān)旈喸噭┱f明書并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在1佳時(shí)間內(nèi)完成檢測，以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線1多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品1多可做五重復(fù)。

* 測蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用 2ul，每個(gè)樣品檢測后需以Kimwipes 低塵擦拭紙（編號： 34155 ）擦拭15~20回，以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。觀看影片。

濃度范圍：

 

 

 

樣品種類	1低濃度	1高濃度 (超過時(shí)請稀釋樣品)	再現(xiàn)性 (五重復(fù)以上)
核酸	2 ng/ul	15000 ng/ul (dsDNA) 12000 ng/ul (RNA)	濃度范圍在 2-100 ng/ul 時(shí)，SD為 ± 2 ng/ul 濃度范圍大于 100 ng/ul 時(shí)，CV為 ± 2%
純BSA	0.10 mg/ml	100 mg/ml	濃度范圍在 0.05-10 mg/ml 時(shí)，SD為 ± 0.10 mg/ml 濃度大于 10 mg/ml 時(shí)，CV為 ± 2%
蛋白質(zhì)，以BCA方式定量	0.2 mg/ml	8.0 mg/ml	CV：± 2% （在可偵測的濃度范圍內(nèi)皆然）
蛋白質(zhì)，以modified Lowry方式定量	0.2 mg/ml	4.0 mg/ml	CV：± 2% （在可偵測的濃度范圍內(nèi)皆然）
蛋白質(zhì)，以Bradford方式定量	100 ug/ml	8000 ug/ml	濃度范圍在 100-500 ug/ml 時(shí)，SD為 ± 25 ug/ml 濃度大于 500 ug/ml 時(shí)，CV為 ± 5%
蛋白質(zhì)，以Mini Bradford方式定量	15 ug/ml	100 ug/ml	濃度范圍在 15-50 ug/ml 時(shí)，SD為 ± 4 ug/ml 濃度大于 50 ug/ml 時(shí)，CV為 ± 5%

 

 

三、技術(shù)參數(shù)：   

1、波長范圍: 190-840nm；   

2、波長精度: 1nm；   

3、分辨率:

4、其它: 1mm光程長度（可自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）；   

5、檢測下限：2ng/μl（dsDNA）；   

6、檢測上限：15000ng/μl（dsDNA）；   

7、吸光率度：0.002 absorbance (1mm光程)；   

8、吸光率準(zhǔn)確性：2%(at 0.76 at 257 nm)；    

9、吸光率范圍：0.02-300 (相當(dāng)于10mm光程)；   

10、核酸檢測周期：

11、體積：14cm×20cm。

 

四、使用方法舉例：

 

dsDNA：在主畫面點(diǎn)選Nucleic Acid，計(jì)算機(jī)與儀器自動(dòng)完成聯(lián)機(jī)。依照DNA所溶于之液體準(zhǔn)備該溶液（務(wù)必確認(rèn)DNA溶于二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測臺上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測臺上，放下上臂后再按Measure。

 

五、結(jié)果整理：

 

 NanoDrop2000 軟件在偵測一開始會詢問檔案欲存至何處，若未，則檔案會存在上一個(gè)使用者的檔案內(nèi)。

 

六、注意事項(xiàng)：

 

1. 偵測后立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭臺面。先取一張將上下臺面的液體吸走，再將此laboratory wipe吸過樣品的面反折到內(nèi)部，折迭四次后以單方向多次擦拭臺面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。

2. 同一滴液體只能做一次偵測，欲重復(fù)定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進(jìn)行偵測。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原則上不超過 2ul。并請使用2ul pipette避免體積不足導(dǎo)致液柱無法完整形成。唯蛋白質(zhì)樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性，務(wù)必使用2ul進(jìn)行偵測。

4. 當(dāng)軟件跳出錯(cuò)誤訊息時(shí)，請?jiān)敿?xì)閱讀并依指示進(jìn)行障礙排除。1常發(fā)生的情形是在偵測過程液柱并未正確形成，軟件會出現(xiàn)以下訊息?？上扔萌庋塾^察液柱是否未完整連接上下臺面，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起后，擦掉該滴樣品，再重新進(jìn)行偵測，必要時(shí)可將樣品體積加大至2ul。

5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之腐蝕樣品，其它無腐蝕性之液體皆可使用。

 

 

七、日常與定期維護(hù)：

* 平時(shí)保持臺面及儀器本身清潔。

* 定期校正。