植物種子活性葉綠體分離試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

圖片僅供參考，以實(shí)物為準(zhǔn)

主要用途

植物種子活性葉綠體分離試劑是一種旨在通過(guò)物理破壁和化學(xué)破膜及離心處理方法，從植物種子組織中分離出完整而純化的活性葉綠體細(xì)胞器的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于菠菜、豌豆、萵苣、卷心菜、甜菜、煙草等各種新鮮植物種子（seed）組織等活性葉綠體成分的分離。用于高等植物不育性、葉綠體功能和活性、遺傳等研究。 產(chǎn)品即到即用，操作簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定，無(wú)核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產(chǎn)量皆高。 

技術(shù)背景

葉綠體（chloroplast）是綠色植物進(jìn)行光合作用和能量轉(zhuǎn)化的重要細(xì)胞器。葉綠體是細(xì)胞質(zhì)中的一種色素體，因含葉綠素而成綠色。葉綠體由外被（envelope）、類囊體（thylakoid）和基質(zhì)（stroma）組成。葉綠體DNA是一種閉合環(huán)狀雙股結(jié)構(gòu)，含有10至30個(gè)基因，編碼200個(gè)蛋白質(zhì)。  

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的凈化液（Reagent C）和活性液（Reagent D）凍融，然后移取20微升活性液（Reagent D）、 1毫升凈化液（Reagent C）和4毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標(biāo)記為裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進(jìn)行下列操作。

1． 準(zhǔn)備好新鮮的植物種子組織，并秤重以確定1至3克組織重量 

2． （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管

3． （選擇步驟）加入5毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4． 用刀片切碎種子組織或液氮里碾碎種子組織成粉末

5． 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管

6． 加入預(yù)冷的5毫升裂解工作液

7． 渦旋震蕩5秒，充分混勻

8． 即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器

9． 置于冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng)8）

10． （選擇步驟）準(zhǔn)備1個(gè)小型漏斗，內(nèi)襯尼龍絲或60微米尼龍網(wǎng)，置于50毫升錐形離心管上

11． （選擇步驟）將所有組織勻漿液移入到小型漏斗里過(guò)濾（注意：可以使用4層紗布替代）

12． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為200g

13． 小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管（如果跳過(guò)過(guò)濾步驟或上清液含有肉眼可見(jiàn)的殘?jiān)?，重?fù)離心5分鐘一次，速度為200g）——此步驟去除細(xì)胞壁殘?jiān)⒓?xì)胞核和未溶解的細(xì)胞 

14． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g

15． 小心抽去上清液，保留綠色沉淀顆粒，避免光照——此步驟獲得葉綠體沉淀物

16． 加入500微升保存液（Reagent E），充分混勻沉淀顆粒群

17． （選擇步驟）進(jìn)行葉綠素定量測(cè)定（建議使用純化葉綠體葉綠素（chlorophyll）含量光度法定量檢測(cè)試劑盒－GMS16061.1）

18． 即刻移入1.5毫升離心管，放進(jìn)－70℃冰箱里保存

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的葉綠體內(nèi)外膜完整

3． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的葉綠體維持正?；钚?/font>

4． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承諾

極威生物秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷(xiāo)售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定，保證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)立即以書(shū)面形式（實(shí)驗(yàn)報(bào)告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致，本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

在運(yùn)用ELISA方法測(cè)定抗體方面，通常所用的方法稱為間接法，也是目前最常用的方法，其原理：間接法首先用抗原包被于固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的，或者至少是極微小的顆粒，經(jīng)洗滌，加入含有被測(cè)抗體之標(biāo)本，再經(jīng)孵育洗滌后，加入酶標(biāo)記抗抗體，(對(duì)人的標(biāo)本來(lái)說(shuō)即加酶標(biāo)抗人球蛋白IgG、IgM)，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色,底物降解的量，即為欲測(cè)抗體的量，其結(jié)果可用目測(cè)或用分光光度計(jì)定量測(cè)定。

操作步驟：

1.將抗原按5 μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)，100 μl /孔，4℃過(guò)夜。

2.次日PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

3.加2％BSA封閉室溫1 h，200 μl /孔。

4.陽(yáng)性對(duì)照從10ug/ml，做倍必稀釋，待測(cè)血清從1：50做倍比稀釋，預(yù)試驗(yàn)后確定稀釋倍數(shù)及陽(yáng)性對(duì)照的起始濃度及稀釋數(shù)量（以可以做標(biāo)準(zhǔn)曲線為參數(shù)），室溫1h。

5.PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

6.加入1：3000（不同公司有不同的推薦稀釋度） PBS－T稀釋的HRP標(biāo)記的山羊抗人IgG，100 μl /孔，室溫1h。

7.PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

8.顯色，100 μl /孔，顏色變深后中止顯色，2M硫酸在BIO－RAD酶標(biāo)儀上讀數(shù)，可用ABTS，OPD，TMB等

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

訂購(gòu)信息

單組份訂購(gòu)信息

編號(hào) 名稱 規(guī)格

GMS16007.2 植物種子活性葉綠體分離試劑盒 20次

GMS16007.2A 清理液（Reagent A） 500毫升

GMS16007.2B 裂解液（Reagent B） 100毫升

GMS16007.2C 凈化液（Reagent C） 100毫升

GMS16007.2D 活性液（Reagent D） 1毫升

GMS16007.2E 保存液（Reagent E） 50毫升

試劑盒訂購(gòu)信息 

 上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，公司由專業(yè)人員提供全程咨詢和技術(shù)支持，包括確定測(cè)定指標(biāo)、選擇合適的試劑盒規(guī)格、試劑盒保存、預(yù)測(cè)定和測(cè)定結(jié)果分析等。公司主營(yíng)產(chǎn)品有elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，植物elisa試劑盒，食品安全系列試劑盒，糖尿病系列試劑盒，細(xì)胞因子系列試劑盒，血漿相關(guān)指標(biāo)elisa試劑盒，一步法試劑盒，生化試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞株，生化試劑，技術(shù)服務(wù)（生化測(cè)試、液相氣相檢測(cè)、ICP-MS測(cè)試），使用的檢測(cè)試劑盒，讓用戶省心；專業(yè)的檢測(cè)服務(wù)，讓用戶省力；優(yōu)惠的價(jià)格，讓用戶省錢(qián)。極威生物已經(jīng)為廣大用戶提供了生化檢測(cè)試劑盒和代測(cè)服務(wù)，幫助他們輕松獲得了真實(shí)可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)，顯著提高了用戶的科研效率，為其發(fā)表高水平的研究論文提供了堅(jiān)實(shí)的平臺(tái)；為研究生按時(shí)畢業(yè)，導(dǎo)師順利結(jié)題、申請(qǐng)新課題和晉升職稱提供了實(shí)實(shí)在在的幫助，公司客戶遍布國(guó)內(nèi)各大學(xué)、醫(yī)院、研究所、衛(wèi)生防疫、生物公司等單位，得到廣大客戶的一致信賴。