超氧化物檢測(cè)試劑盒    E2001

描述：超氧化物檢測(cè)試劑盒（Superoxide Assay Kit）是一種用于超氧化物快速高靈敏檢測(cè)的試劑盒。超氧化物通常指超氧陰離子(superoxide anion)，是一種氧分子的自由基，在細(xì)胞內(nèi)主要有NADPH氧化酶把電子傳遞給氧分子產(chǎn)生。超氧陰離子是一種強(qiáng)氧化劑，主要由中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為代表的免疫細(xì)胞，在各種應(yīng)激條件下產(chǎn)生，從而抵御微生物的感染。在病理?xiàng)l件下，過(guò)度產(chǎn)生的超氧陰離子，也會(huì)導(dǎo)致機(jī)體損傷和引發(fā)各種疾病。

原理：本試劑盒利用超氧化物可以還原WST-1產(chǎn)生可溶性有色物質(zhì)為基礎(chǔ)來(lái)檢測(cè)超氧化物。試劑盒的檢測(cè)試劑中添加了過(guò)氧化氫酶（Catalase）等，可以清除過(guò)氧化氫等過(guò)氧化物對(duì)WST-1顯色的干擾，使測(cè)定結(jié)果更加準(zhǔn)確。另外本試劑盒還提供了超氧化物歧化酶（SOD），可以驗(yàn)證本試劑盒檢測(cè)的是否為超氧化物，以排除檢測(cè)體系中其它可能存在的干擾。對(duì)于本試劑盒，加入SOD通?？梢砸种?/span>90%以上的超氧化物。

適用范圍：

試劑盒組成：

（1）超氧化物檢測(cè)緩沖液  50 ml/瓶（2）WST-1溶液   1 ml/管

（3）Catalase溶液  200μl/管（4）SOD溶液  50μl/管

儲(chǔ)存條件：-20℃儲(chǔ)存，一年有效

所需設(shè)備: 酶標(biāo)儀，最佳波長(zhǎng)450nm

操作步驟：

1.  超氧化物檢測(cè)工作液的配制：

根據(jù)測(cè)定樣本數(shù)量按下表所示比例配制超氧化物檢測(cè)工作液。

2.  細(xì)胞接種和孵育：取需要測(cè)定的細(xì)胞，如果是懸浮細(xì)胞，利用PBS洗滌一次，再利用超氧化物檢測(cè)緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整到合適濃度后，接種100 μl到96孔板中（細(xì)胞數(shù)量請(qǐng)通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化）；如果是貼壁細(xì)胞，提前一天接種到96孔板中，24小時(shí)后吸去培養(yǎng)基，利用PBS洗滌一次，再加入100 μl超氧化物檢測(cè)緩沖液。然后加入相應(yīng)的超氧化物檢測(cè)工作液配制的藥物及超氧化物刺激劑（如PMA等），在37℃培養(yǎng)箱孵育1小時(shí)或經(jīng)過(guò)優(yōu)化的時(shí)間。

具體檢測(cè)對(duì)照設(shè)置如下表所示：

3. 孵育結(jié)束后，利用酶標(biāo)儀測(cè)定A_450nm。如果樣品吸光度過(guò)高，可適當(dāng)降低接種細(xì)胞數(shù)量或縮短孵育時(shí)間后測(cè)定，如果樣品吸光度過(guò)低，可適當(dāng)增加接種細(xì)胞數(shù)量或延長(zhǎng)孵育時(shí)間后測(cè)定。

4、數(shù)據(jù)處理：

利用未加干預(yù)因素處理的樣品和加了干預(yù)因素處理的樣品吸光度減去空白對(duì)照吸光度后，計(jì)算干預(yù)因素對(duì)超氧化物產(chǎn)生的上調(diào)或下調(diào)比例。

注意事項(xiàng)

1. WST-1溶液、Catalase溶液和SOD溶液請(qǐng)盡量避免反復(fù)凍融，可以適當(dāng)分裝。

2. 初次使用試劑盒時(shí)，小體積液體試劑請(qǐng)適當(dāng)離心后使用。

3. 初次測(cè)定超氧化物，可取小鼠骨髓細(xì)胞，500000細(xì)胞/孔接種到96孔板中，利用50ng/mlPMA刺激1小時(shí)，檢測(cè)超氧化物作為陽(yáng)性對(duì)照。

4. 本產(chǎn)品僅限專(zhuān)業(yè)人員用于科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。