1 依據(jù)

本指導(dǎo)原則依據(jù)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 15193系列標(biāo)準(zhǔn)制定。

2 范圍

本指導(dǎo)原則適用于保健食品及其原料的安全性毒理學(xué)的檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)。

3 受試物

3.1 受試物為保健食品或保健食品原料。

3.2 資料要求

3.2.1 應(yīng)提供受試物的名稱、性狀、規(guī)格、批號(hào)、生產(chǎn)日期、保質(zhì)期、保存條件、申請(qǐng)單位名稱、生產(chǎn)企業(yè)名稱、配方、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、保健功能以及推薦攝入量等信息。

3.2.2 受試物為保健食品原料時(shí)，應(yīng)提供動(dòng)物和植物類原料的產(chǎn)地和食用部位、微生物類原料的分類學(xué)地位和生物學(xué)特征、食用條件和方式、食用歷史、食用人群等基本信息，以及其他有助于開(kāi)展安全性評(píng)估的相關(guān)資料。

3.2.3 原料為從動(dòng)物、植物、微生物中分離的成分時(shí)，還需提供該成分的含量、理化特性和化學(xué)結(jié)構(gòu)等資料。

3.2.4 提供受試物的主要成分、功效成分/標(biāo)志性成分及可能含有的有害成分的分析報(bào)告。

3.3 受試物的特殊要求

3.3.1 保健食品應(yīng)提供包裝完整的定型產(chǎn)品。毒理學(xué)試驗(yàn)所用樣品批號(hào)應(yīng)與功能學(xué)試驗(yàn)所用樣品批號(hào)一致，并且為衛(wèi)生學(xué)試驗(yàn)所用三批樣品之一（益生菌、奶制品等產(chǎn)品保質(zhì)期短于整個(gè)試驗(yàn)周期的產(chǎn)品除外）。根據(jù)技術(shù)審評(píng)意見(jiàn)要求補(bǔ)做試驗(yàn)的，若原批號(hào)樣品已過(guò)保質(zhì)期，可使用新批號(hào)的樣品開(kāi)展試驗(yàn)，但應(yīng)提供新批號(hào)樣品按產(chǎn)品技術(shù)要求檢驗(yàn)的全項(xiàng)目檢驗(yàn)報(bào)告。

3.3.2 由于推薦量較大等原因不適合直接以定型產(chǎn)品進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，可以對(duì)送檢樣品適當(dāng)處理，如濃縮等。為滿足安全倍數(shù)要求，可去除部分至全部輔料，如去除輔料后仍未達(dá)到安全倍數(shù)要求，可部分去除已知安全的食品成分等。應(yīng)提供受試樣品處理過(guò)程的說(shuō)明和相應(yīng)的證明文件，處理過(guò)程應(yīng)與原保健食品的主要生產(chǎn)工藝步驟保持一致。

4 毒理學(xué)試驗(yàn)的主要項(xiàng)目

依據(jù)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 15193的相關(guān)評(píng)價(jià)程序和方法開(kāi)展下列試驗(yàn)。

4.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

4.2 遺傳毒性試驗(yàn)：細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)，哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，小鼠精原細(xì)胞或精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，體外哺乳類細(xì)胞HGPRT基因突變?cè)囼?yàn)，體外哺乳類細(xì)胞TK基因突變?cè)囼?yàn)，體外哺乳類細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，嚙齒類動(dòng)物顯性致死試驗(yàn)，體外哺乳類細(xì)胞DNA損傷修復(fù)（非程序性DNA合成）試驗(yàn)，果蠅伴性隱性致死試驗(yàn)。

遺傳毒性試驗(yàn)組合：一般應(yīng)遵循原核細(xì)胞與真核細(xì)胞、體內(nèi)試驗(yàn)與體外試驗(yàn)相結(jié)合的原則，并包括不同的終點(diǎn)（誘導(dǎo)基因突變、染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量變化），推薦下列遺傳毒性試驗(yàn)組合：

組合一：細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)；哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)或哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)；小鼠精原細(xì)胞或精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)或嚙齒類動(dòng)物顯性致死試驗(yàn)。

組合二：細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)；哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)或哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)；體外哺乳類細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)或體外哺乳類細(xì)胞TK基因突變?cè)囼?yàn)。

根據(jù)受試物的特點(diǎn)也可用其他體外或體內(nèi)測(cè)試替代推薦組合中的一個(gè)或多個(gè)體外或體內(nèi)測(cè)試。

4.328天經(jīng)口毒性試驗(yàn)

4.4致畸試驗(yàn)

4.590天經(jīng)口毒性試驗(yàn)

4.6 生殖毒性試驗(yàn)

4.7 毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)

4.8 慢性毒性試驗(yàn)

4.9 致癌試驗(yàn)

4.10慢性毒性和致癌合并試驗(yàn)

5毒性試驗(yàn)的選擇

5.1 保健食品原料

需要開(kāi)展安全性毒理學(xué)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)的保健食品原料，其試驗(yàn)的選擇應(yīng)參照新食品原料毒理學(xué)評(píng)價(jià)有關(guān)要求進(jìn)行。

5.2保健食品

5.2.1 保健食品一般應(yīng)進(jìn)行急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)和28天經(jīng)口毒性試驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和目標(biāo)人群決定是否增加90天經(jīng)口毒性試驗(yàn)、致畸試驗(yàn)和生殖毒性試驗(yàn)、慢性毒性和致癌試驗(yàn)及毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)。

5.2.2 以普通食品為原料，僅采用物理粉碎或水提等傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)、食用方法與傳統(tǒng)食用方法相同，且原料推薦食用量為常規(guī)用量或符合國(guó)家相關(guān)食品用量規(guī)定的保健食品，原則上可不開(kāi)展毒性試驗(yàn)。

5.2.3 采用導(dǎo)致物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生重大改變等非傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的保健食品，應(yīng)進(jìn)行急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)、90天經(jīng)口毒性試驗(yàn)和致畸試驗(yàn)，必要時(shí)開(kāi)展其他毒性試驗(yàn)。

6特定產(chǎn)品的毒理學(xué)設(shè)計(jì)要求

6.1 針對(duì)產(chǎn)品配方中含有人體必需營(yíng)養(yǎng)素或已知存在安全問(wèn)題的物質(zhì)的產(chǎn)品，如某一過(guò)量攝入易產(chǎn)生安全性問(wèn)題的人體必需營(yíng)養(yǎng)素（如維 生素A、硒等）或已知存在安全問(wèn)題物質(zhì)（如咖 啡因等），在按其推薦量設(shè)計(jì)試驗(yàn)劑量時(shí)，如該物質(zhì)的劑量達(dá)到已知的毒性作用劑量，在原有劑量設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上，應(yīng)考慮增設(shè)去除該物質(zhì)或降低該物質(zhì)劑量（如降至未觀察到有害作用劑量）的受試物劑量組，以便對(duì)受試物中其他成分的毒性作用及該物質(zhì)與其他成分的聯(lián)合毒性作用做出評(píng)價(jià)。

6.2 推薦量較大的含乙醇的受試物，在按其推薦量設(shè)計(jì)試驗(yàn)劑量時(shí)，如超過(guò)動(dòng)物最大灌胃容量，可以進(jìn)行濃縮。乙醇濃度低于15％（V/V）的受試物，濃縮后應(yīng)將乙醇恢復(fù)至受試物定型產(chǎn)品原來(lái)的濃度。乙醇濃度高于15％的受試物，濃縮后應(yīng)將乙醇濃度調(diào)整至15％，并將各劑量組的乙醇濃度調(diào)整一致。不需要濃縮的受試物，其乙醇濃度高于15％時(shí)，應(yīng)將各劑量組的乙醇濃度調(diào)整至15％。在調(diào)整受試物的乙醇濃度時(shí)，原則上應(yīng)使用生產(chǎn)該受試物的酒基。

6.3 針對(duì)適宜人群包括孕婦、乳母或兒童的產(chǎn)品，應(yīng)特別關(guān)注是否存在生殖毒性和發(fā)育毒性，必要時(shí)還需檢測(cè)某些神經(jīng)毒性和免疫毒性指標(biāo)。

6.4有特殊規(guī)定的保健食品，應(yīng)按相關(guān)規(guī)定增加相應(yīng)的試驗(yàn)，如含有益生菌、真菌等，應(yīng)當(dāng)按照《保健食品原料用菌種安全性檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》開(kāi)展相關(guān)試驗(yàn)。

7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)共性問(wèn)題

7.1 受試物的前處理

7.1.1袋泡茶類受試物的提取方法應(yīng)與產(chǎn)品推薦飲用的方法相同，可用該受試物的水提取物進(jìn)行試驗(yàn)。如果產(chǎn)品無(wú)特殊推薦飲用方法，水提取物可采用以下提取條件進(jìn)行：常壓、溫度80℃～90℃，浸泡時(shí)間30 min，水量為受試物質(zhì)量的10倍或以上，提取2次，將提取液合并濃縮至所需濃度，并標(biāo)明該濃縮液與原料的比例關(guān)系。如產(chǎn)品有特殊推薦服用方法（如推薦食用浸泡后的產(chǎn)品），在毒理學(xué)試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)予以考慮。

7.1.2液體受試物需要進(jìn)行濃縮處理時(shí)，應(yīng)采用不破壞其中有效成分的方法?？墒褂脺囟?0℃～70℃減壓或常壓蒸發(fā)濃縮、冷凍干燥等方法。液體受試物經(jīng)濃縮后達(dá)到人體推薦量的試驗(yàn)要求，如不能通過(guò)灌胃給予的，容許以摻入飼料的方式給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

7.1.3 不易粉碎的固體受試物（如蜜餞類和含膠基的受試物）可采用冷凍干燥后粉碎的方式處理，并在試驗(yàn)報(bào)告中詳細(xì)說(shuō)明。

7.1.4 含益生菌或其他微生物的受試物在進(jìn)行細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)或體外細(xì)胞試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)將微生物滅活，并說(shuō)明具體方法。

7.1.5 對(duì)人體推薦量較大的受試物，在按其推薦量設(shè)計(jì)試驗(yàn)劑量時(shí)，如超過(guò)動(dòng)物的最大灌胃容量或超過(guò)摻入飼料中的限量（10％（w/w）），可允許去除無(wú)安全問(wèn)題的部分至全部輔料或已知安全的食品成分進(jìn)行試驗(yàn)，并在試驗(yàn)報(bào)告中詳細(xì)說(shuō)明。

7.1.6 吸水膨脹率較高的受試物應(yīng)考慮受試物吸水膨脹后對(duì)給予劑量和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響，應(yīng)選擇合適的受試物給予方式（灌胃或摻入飼料）。如采用灌胃方式給予，應(yīng)選擇水為溶媒。

7.2 受試物的給予方式

7.2.1 受試物應(yīng)經(jīng)口給予。根據(jù)受試物的性質(zhì)及人體推薦攝入量，選擇摻入飼料或飲水、灌胃的方式給予受試物。應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明受試物配制方法、給予方法和時(shí)間。

7.2.2 灌胃給予受試物時(shí)，應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和受試物的理化性質(zhì)選擇適合的溶媒（溶劑、助懸劑或乳化劑），將受試物溶解或懸浮于溶媒中。溶媒一般可選用蒸餾水、純凈水、食用植物油、食用淀粉、明膠、羧甲基纖維素、蔗糖脂肪酸酯等，如使用其他溶媒應(yīng)說(shuō)明理由。所選用的溶媒本身應(yīng)不產(chǎn)生毒性作用；與受試物各成分之間不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，且保持其穩(wěn)定性；無(wú)特殊刺激性或氣味。

7.2.3摻入飼料或飲水方式給予受試物時(shí)，應(yīng)保證受試物的穩(wěn)定性、均一性及適口性，以不影響動(dòng)物攝食、飲水量和營(yíng)養(yǎng)均衡為原則。當(dāng)受試物在飼料中的加入量超過(guò)5％（w/w）時(shí)，需考慮動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需要，結(jié)合受試物的蛋白質(zhì)含量將各組飼料蛋白質(zhì)水平調(diào)整一致，并說(shuō)明具體調(diào)整方法。飼料中添加受試物的比例最高不超過(guò)10％（w/w）。

7.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)符合相應(yīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求，同時(shí)結(jié)合保健功能（如輔助改善記憶、緩解體力疲勞等）的特點(diǎn)選擇適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)動(dòng)物的品系、性別和年齡等。

8 試驗(yàn)結(jié)果的判定與應(yīng)用

8.1 急性毒性試驗(yàn)

8.1.1 原料

如LD50小于人的推薦（可能）攝入量的100倍，則一般應(yīng)放棄該受試物作為保健食品原料，不再繼續(xù)進(jìn)行其他毒理學(xué)試驗(yàn)。

8.1.2 保健食品

8.1.2.1 如LD50小于人的可能攝入量的100倍，則放棄該受試物作為保健食品。如LD50大于或等于100倍者，則可考慮進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗(yàn)。

8.1.2.2 如動(dòng)物未出現(xiàn)死亡的劑量大于或等于10g/kg·BW（涵蓋人體推薦量的100倍），則可進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗(yàn)。

8.1.2.3 對(duì)人的可能攝入量較大和其它一些特殊原料的保健食品，按最大耐受量法給予最大劑量動(dòng)物未出現(xiàn)死亡，也可進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗(yàn)。

8.2 遺傳毒性試驗(yàn)

8.2.1 如三項(xiàng)試驗(yàn)均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步的毒性試驗(yàn)。

8.2.2 如遺傳毒性試驗(yàn)組合中兩項(xiàng)或以上試驗(yàn)陽(yáng)性，則表示該受試物很可能具有遺傳毒性和致癌作用，一般應(yīng)放棄該受試物應(yīng)用于保健食品。

8.2.3如遺傳毒性試驗(yàn)組合中一項(xiàng)試驗(yàn)為陽(yáng)性，根據(jù)其遺傳毒性終點(diǎn)、結(jié)合受試物的結(jié)構(gòu)分析、化學(xué)反應(yīng)性、生物利用度、代謝動(dòng)力學(xué)、靶器官等資料綜合分析，再選兩項(xiàng)備選試驗(yàn)（至少一項(xiàng)為體內(nèi)試驗(yàn)）。如再選的試驗(yàn)均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步的毒性試驗(yàn)；如其中有一項(xiàng)試驗(yàn)陽(yáng)性，則應(yīng)放棄該受試物應(yīng)用于保健食品。

8.328天經(jīng)口毒性試驗(yàn)

對(duì)只需要進(jìn)行急性毒性、遺傳毒性和28天經(jīng)口毒性試驗(yàn)的受試物，若試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有明顯毒性作用，綜合其他各項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果可做出初步評(píng)價(jià)；若試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有明顯毒性作用，尤其是存在劑量-反應(yīng)關(guān)系時(shí)，應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。

8.490天經(jīng)口毒性試驗(yàn)

根據(jù)試驗(yàn)所得的未觀察到有害作用劑量進(jìn)行評(píng)價(jià)，原則是：

a)未觀察到有害作用劑量小于或等于人的推薦（可能）攝入量的100倍表示毒性較強(qiáng)，應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。

b)未觀察到有害作用劑量大于100倍而小于300倍者，應(yīng)進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)。

c)未觀察到有害作用劑量大于或等于300倍者則不必進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)，可進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。

8.5 致畸試驗(yàn)

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)受試物是否為該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的致畸物。若致畸試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性則不再繼續(xù)進(jìn)行生殖毒性試驗(yàn)和生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)。在致畸試驗(yàn)中觀察到的其他發(fā)育毒性，應(yīng)結(jié)合28天和（或）90天經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，必要時(shí)進(jìn)行生殖毒性試驗(yàn)和生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)。

8.6 生殖毒性試驗(yàn)和生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)

根據(jù)試驗(yàn)所得的未觀察到有害作用劑量進(jìn)行評(píng)價(jià)，原則是：

a)未觀察到有害作用劑量小于或等于人的推薦（可能）攝入量的100倍表示毒性較強(qiáng)，應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。

b)未觀察到有害作用劑量大于100倍而小于300倍者，應(yīng)進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)。

c)未觀察到有害作用劑量大于或等于300倍者則不必進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)，可進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。

8.7 慢性毒性和致癌試驗(yàn)

8.7.1 根據(jù)慢性毒性試驗(yàn)所得的未觀察到有害作用劑量進(jìn)行評(píng)價(jià)的原則是：

a)未觀察到有害作用劑量小于或等于人的推薦（可能）攝入量的50倍者，表示毒性較強(qiáng)，應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。

b)未觀察到有害作用劑量大于50倍而小于100倍者，經(jīng)安全性評(píng)價(jià)后，決定該受試物可否用于保健食品。

c)未觀察到有害作用劑量大于或等于100倍者，則可考慮允許使用于保健食品。

8.7.2 根據(jù)致癌試驗(yàn)所得的腫瘤發(fā)生率、潛伏期和多發(fā)性等進(jìn)行致癌試驗(yàn)結(jié)果判定的原則是（凡符合下列情況之一，可認(rèn)為致癌試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。若存在劑量-反應(yīng)關(guān)系，則判斷陽(yáng)性更可靠）：

a)腫瘤只發(fā)生在試驗(yàn)組動(dòng)物，對(duì)照組中無(wú)腫瘤發(fā)生。

b)試驗(yàn)組與對(duì)照組動(dòng)物均發(fā)生腫瘤，但試驗(yàn)組發(fā)生率高。

c)試驗(yàn)組動(dòng)物中多發(fā)性腫瘤明顯，對(duì)照組中無(wú)多發(fā)性腫瘤，或只是少數(shù)動(dòng)物有多發(fā)性腫瘤。

d)試驗(yàn)組與對(duì)照組動(dòng)物腫瘤發(fā)生率雖無(wú)明顯差異，但試驗(yàn)組中發(fā)生時(shí)間較早。

致癌試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性應(yīng)放棄將該受試物用于保健食品。