在大型法蘭消費中，影響大型法蘭的性能要素有很多，下面我們說下常見的幾個要素，首先是退火溫度(退火溫度為引物和模板分離時分的溫度參數(shù)，當50%的引物和互補序列表現(xiàn)為雙鏈DNA分子時的溫度·它是影響PCR特異性的較重要要素。在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性分離。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度普通設(shè)定比引物的Tm低5℃。