大鼠Kelch樣ECH關(guān)聯(lián)蛋白1(KEAP1) ELISA Kit
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大鼠Kelch樣ECH關(guān)聯(lián)蛋白1(KEAP1)ELISA-Kit

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上海博爾森生物科技有限公司

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品牌 博爾森/BIOESN
樣本 大鼠
應(yīng)用 科研
保存方法 -20°C
檢測方法 sandwich
商品介紹

檢測原理：

博爾森生物生產(chǎn)的ELISA試劑盒采用“夾心法”:將捕獲抗體包被于酶標板上，捕獲樣品及標準品中的靶蛋白，生物素化的檢測抗體與靶蛋白結(jié)合， SABC復(fù)合物與生物素化檢測抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，加入TMB顯色液后，若反應(yīng)孔中有靶蛋白則顯藍色，加入終止液變黃色，檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標儀在450 nm處測OD值，靶蛋白濃度與OD值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出標本中靶蛋白的濃度。
試劑盒組分: （保存溫度4℃）

名     稱規(guī)格（48 T）規(guī)格（96 T）
預(yù)包被酶標板8×6條8×12條
標準品1支1支
標準品/樣品稀釋液10ml15ml
生物素化檢測抗體（100×）60ul120ul
生物素化檢測抗體稀釋液6ml12ml
SABC復(fù)合物6ml12ml
TMB顯色液（A/B）各3ml各6ml
終止液6ml12ml
20×濃縮洗滌液30ml60ml
封板膠紙2張4張
產(chǎn)品說明書1份1份

本試劑盒適用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清及其它生物體液。

標本收集與試劑準備:

1、血清、血漿樣本收集應(yīng)使用一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝均可），血清、血漿避免使用溶血，高血脂標本，標本懸浮物應(yīng)離心去除，使標本清澈透明。待測樣本應(yīng)盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-80℃）保存，避免反復(fù)凍融。
2、洗滌液配置：用蒸餾水1:20稀釋（例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的蒸餾水）
3、標準品配制：取8個1.5ml離心管，分別標注S1,S2,S3,S4,S5,S6，S7,blank,第一管S1中加入標準品/樣品稀釋液900ul，第二至第八管中分別加入標準品/樣品稀釋液200ul，在第一管中加入（40ng/ml）標準品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管，如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出200ul棄去，第八管為空白對照。標準曲線濃度為:（標準品的用量及標準曲線范圍也可根據(jù)自己需要配置）。
4、
5、生物素化抗體工作液配置:使用前20分鐘，用生物素化抗體稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×工作液，根據(jù)所需用量配置，當日使用，剩余棄之。
6、TMB顯色液的配置：使用前10分鐘，將TMB顯色液A液和B液1：1混合，避光放置備用。
7、如果您檢測的樣本中靶蛋白濃度高于標準品最高值，建議重新檢測，請根據(jù)實際情況，適當倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))。

檢測程序:

1、加樣：空白孔加入50μl標準品/樣品稀釋液，其余孔各加入標準品或待測樣品50ul，將反應(yīng)板混勻后置37℃，40分鐘。
2、洗板：用1×洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震蕩/浸泡1-2分鐘，向濾紙上印干。
3、空白孔加入100ul生物素化抗體稀釋液，其余孔各加入1×的生物素化抗體工作液100ul，混勻后置37℃，20分鐘。
4、洗板：同上。
5、每孔加入SABC復(fù)合物工作液100ul，混勻后置37℃，20分鐘。
6、洗板：同上。
7、每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混勻后置37 ℃暗處反應(yīng)10-20分鐘（具體顯色時間根據(jù)顯色結(jié)果而定）。
8、每孔加入100ul終止液，混勻，30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。

結(jié)果判斷與計算：

1、所有OD值建議減除空白孔值后再進行計算，如空白孔OD低于0.1，也可以直接計算。
2、以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，手工繪制或用軟件繪制標準曲線，根據(jù)樣品OD值計算出相應(yīng)含量，再乘以稀釋倍數(shù)即可。

試劑盒性能:

1、特異性:同時可檢測重組或天然的蛋白 不與其它細胞因子有交叉反應(yīng)
2、重復(fù)性:板內(nèi)，板間變異系數(shù)均小于10%。

注意事項

1、在試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙孔檢測，每次檢測都應(yīng)做標準曲線。
2、洗滌過程很關(guān)鍵，洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高，從冰箱中取出的濃縮洗滌液
3、可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象，37℃水浴使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。檢測時所有試劑都要恢復(fù)到室溫，板條開封后剩余板條需封好，放回袋中1 個月內(nèi)用完。
4、試劑盒使用超敏TMB溶液，顯色過深時會出現(xiàn)沉淀狀，屬正常現(xiàn)象，混勻即可，不影響結(jié)果判讀。
5、說明書以試劑盒內(nèi)紙質(zhì)版為準,本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！


本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究使用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

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公司名稱 上海博爾森生物科技有限公司
聯(lián)系賣家 楊柳 （QQ：3597200582）
電話 钺钹钳-钸钵钸钻钳钻钻钵
手機 钳钶钳钸钸钺钸钳钳钼钹
網(wǎng)址 https://www.bioesn.net/
地址 上海市松江區(qū)
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