柱式昆蟲DNAout

本產(chǎn)品是專門用于從昆蟲、節(jié)肢動物、蛔蟲、扁形蟲和一些富含多糖的動物組織中提取基因組 DNA 的試劑盒。其原理是基于去垢劑在適當(dāng)?shù)碾x子強度條件下，特異地跟基因組 DNA 結(jié)合形成沉淀，然后在用硅膠膜離心吸附法進(jìn)行進(jìn)一步純化得到DNA。本產(chǎn)品具有下列特點：

1. 適用于用常規(guī)方法難以提取的、各種富含多糖的動物，包括昆蟲、節(jié)肢動物、蛔蟲、扁形蟲等。

2. 除新鮮樣品外，還適合于各種保存狀態(tài)的樣品，包括冷凍的樣品、用乙醇保存的樣品和福爾馬林保存的樣品。

3. 提取到的基因組 DNA 完整性，長度一般在 20-50 Kb。

4. DNA 純凈，OD260/280 一般都在 1.8 左右，可直接用于 PCR、酶切、雜交等。

5. 操作簡單，整個過程約 30 分鐘。

6. 安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 50 次包裝 
溶液 A 81101A 50 mL 溶液 B 81101B 50 mL 溶液 C 81101C 50 mL 離心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊 1 份

運輸及保存 常溫運輸及保存，有效期一年。

自備試劑 氯仿。

使用方法

1. 稱取 0.1-0.3 g 昆蟲樣品轉(zhuǎn)移到塑料研缽中，液氮研磨成粉后轉(zhuǎn)移到一個干凈的 1.5 mL 塑料離心管中。注意：好避免使用含二氧化硅的玻璃研缽，因為 DNA 會吸附在表面，影響得率。

2. 在離心管中加入 1 mL 65℃預(yù)熱的溶液 A 并用移液槍頭充分吹打混勻（如果溶液 A 有沉淀，需先在 65℃加熱溶解后搖勻再使用）。

3. 65℃保溫 5-30 分鐘，其間好吹打混勻 2-3 次。

4. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘。

5. 將不超過 0.75 mL 的上清轉(zhuǎn)移到新離心管中。有時候上清液中還會有少量細(xì)小懸浮物，但對后續(xù)操作沒有影響，不必進(jìn)行特殊處理。

6. 在上清液中加入等體積的溶液 B，上下顛倒 30 秒充分混勻，溶液將呈白色混濁狀。

7. 將其置于冰浴中放置 5-10 分鐘。

8. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的 1.5 mL 塑料離心管中。

9. 加入 0.2 mL 的氯仿(自備)，震蕩器上充分振蕩 30 秒混勻。

10. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，兩相交界面將有白色膜狀物，小心轉(zhuǎn)移上清到新 1.5-5mL 塑料離心管中。注意：由于下一步要加 1.5 倍體積的溶液 C，所以新的離心管的體積要足夠大。

11. 加入 1.5 倍體積的溶液 C，上下顛倒 30 秒混勻，然后分多次的將混合液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。

12. 每次轉(zhuǎn)移 0.7-0.8 mL 混合液后，室溫放置 5-10 分鐘。

13. 12000-15000 g 室溫 1 分鐘，棄穿透液。

14. 對需要多次上柱的樣品，可以在此將剩余的樣品加到離心吸附柱式中，重復(fù)第12-14 步的操作。

15. 將 0.7 mL 通用洗柱液加入離心柱，室溫離心 1 分鐘，棄穿透液。

16. 在離心吸附柱中加入 0.3 mL 的通用洗柱液，12000-15000 g 離心半分鐘（此步為第二次洗滌）。

17. 空甩 1 分鐘去除殘留液體。

18. 將離心柱放置在一新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 30-100 uL DNA 洗脫液2.0。

19. 室溫放置 5 分鐘后離心 1 分鐘，管底即為昆蟲 DNA 溶液，可立即使用，也可長期保存在－20℃。

20. 可以重復(fù)上步一次，以洗脫更多的 DNA。