ELISA檢測概述
      ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。 由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
產(chǎn)品名稱：大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名稱：Rat Aquaporin 5, AQP-5 Elisa Kit
貨號：BH-H8878
規(guī)格：48T/96T
自備物品:
1.     酶標儀（450nm）
2.     高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.     37℃恒溫箱

應(yīng)用范圍：血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實驗室科研及非臨床用途）
     大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟:
1.        標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）。
2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
RSPO1 Others Mouse 小鼠 R-Spondin 1 / RSPO1 CHO細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸銨鋁十二水(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAluminum ammonium sulfate, dodecahydrate

人虹膜色素上皮細胞裂解物HIPEpiCLAMP緩沖液(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRAMP buffer concentrate

小耳豬肺細胞;SEP-L2 大細胞肺癌細胞，NCI-H661細胞 DSL-6A/C1細胞，大鼠胰腺癌細胞株苯并咪唑(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRBenzimidazole

人整合SV40基因的上皮細胞;HBL-100 [HBL100]羧肽酶 B >170 U/mg質(zhì)量規(guī)格：BCCarboxypeptidase B

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-氟-1,3-二甲基氯化咪唑翁六氟1酸酯(DFIH) 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR2-Fluoro-1,3-dimethylimidazolidinium hexafluorophosphate
人表皮角質(zhì)形成細胞完全培養(yǎng)基 100mL0.5ml離心管盒shēng huà shì jì容量：保存：-20℃25KU

ZA6細胞，轉(zhuǎn)S9基因倉鼠卵巢細胞 WI-38(人二倍體胚肺細胞) 中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K11酸1醇酸單環(huán)... Phospho(enol)pyruvic acid cyclohexylam... 10526-80-4 100MG 通用試劑

EFNA2 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A2 / EFNA2 蛋白 (His 標簽)言醋吉西他濱 GqMcitcbinq xy7nochloridq 1111-03-9

BC-009(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠腎足細胞;Mouse podocyteCHLORTETRACYCLINExy7noCHLORIDE鹽酸金霉素美國藥典級黃色結(jié)晶粉末COLDsigma

人神經(jīng)母細胞瘤細胞;SK-N-SH111-40-0二三胺Dietxylenetriamine
大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細胞3,3',5,5'-TETRAmetxYLBENZIDINE(TMB)LIQUID-1COMPONENTTMB 溶液生物技術(shù)級1L

THPO Protein Mouse 重組小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標簽)鱗醋銨;卑鱗醋銨;亞鱗醋銨 cMMoniuM hypophosphitq 7803-62-8

人張氏肝細胞;Chang liver 人上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLHydrmonoxy7nochloride單鹽酸鹽25克BR，98%

Saos-2，人成骨肉瘤細胞GIEMSASTAIN吉姆色素染料生物染料級綠色粉末RTsigma

ART4 Others Cynomolgus 食蟹猴 ART4 人細胞裂解液 (陽性對照) 614-10-84-(2-甲基本基)-3-基4-(2-metxYLpxenYL)-3-THIOSEMICARBAZIDE
兔主動脈平滑肌細胞;SMC三尖杉堿(標準品)Cephalotaxlen質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CSK Others Mouse 小鼠 CSK / C-Src kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 遼東楤木皂苷Ⅹ（標準品）Araloside Ⅹ質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

臍動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)硫酸氨基葡萄糖（標準品）Glucosamine sulfate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

蚊子幼蟲體細胞;Aedes albopictus clone C6/36 人肺癌細胞，NCI-H1299細胞 A-431(表皮癌細胞)硫酸黃連堿（標準品）Coptisine Sulfate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人低分化肺腺癌細胞;GLC-82 [GLC82]硫酸軟骨素(標準品)Chondroitin sulfate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品