禽流感病毒N9亞型檢測試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法） 

檢測方法： 實(shí)時(shí)熒光 PCR

規(guī)    格： 50T

保存方式： 2~8℃

有 效 期： 1年

產(chǎn)    地： 中國

用    途： 僅用于科研實(shí)驗(yàn)

禽流感病毒N9亞型檢測試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法） 

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禽流感病毒N9亞型檢測試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法） 

利用ELISA進(jìn)行檢驗(yàn)常見的樣本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。

1、抗原：ELISA抗原有三類：液體中純化的自然抗原、合成抗原和基因重組抗原。

純度不高可導(dǎo)致試劑盒的特異性不強(qiáng)，合成抗原一般都是多肽抗原，

試劑盒一般為基因重組抗原。抗原純度不高，特異性就不強(qiáng)，

2、抗體特異性和親和力的大小會(huì)影響試劑盒的特異性和敏感性

3、酶結(jié)合物，試劑盒的保存時(shí)間通常由酶的穩(wěn)定性決定。

最常用的就是辣根過氧化酶-HRP.其他還有堿性磷酸酶和β半乳糖苷酶。

ELISA溫浴和洗滌一般為磷酸鹽緩沖液（PBS）

堿性磷酸酶的話就不能用PBS洗滌了，因?yàn)闅埩舻腜BS會(huì)抑制一半的酶活性。

TMB顯色液取代了OPD為HRP最常用的色原底物。為氧化還原反應(yīng)（OPD對機(jī)體有突變作用，所以改用TMB）

禽流感病毒N9亞型檢測試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法） 操作步驟
1  病毒 RNA 的提取
1.1  取已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入裂解液 600 μL，充分顛倒混勻，室溫靜置 3～

5 min。

1.2  將液體吸入吸附柱中（吸附柱要套上收集管，吸取液體時(shí)盡量不要吸到懸浮雜質(zhì)，以免離心時(shí) 堵塞吸附柱），13000 rpm 離心 30 s。

1.3  棄去收集管中液體，加入 600 μL 洗液，13000 rpm 離心 30 s。

1.4 重復(fù)步驟 1.3。

1.5 棄去收集管中液體，13000 rpm 空柱離心 2 min，以除去殘留的洗滌液。

1.6  將吸附柱移入新的 1.5 mL 離心管中，向柱中央加入洗脫液 50 μL，室溫靜置 1 min，13000 rpm

離心 30 s，離心管中液體即為模板 RNA。

2  實(shí)時(shí)熒光 RT-PCR 操作
設(shè)被檢樣品、陰性對照和陽性對照總和為 N，則反應(yīng)體系配制如下： 試劑 體系



無菌無核酸酶水 2.7（N+1）μL

RT-PCR 反應(yīng)液 10（N+1）μL

酶混合液 0.4（N+1）μL

熒光探針 1.9（N+1）μL



將以上配制的反應(yīng)體系充分混勻后，分裝每個(gè)反應(yīng)管中各 15 μL。

分別取 5 μL 模板 RNA，加入相應(yīng)反應(yīng)管中，混勻并作好標(biāo)記，在熒光 PCR 儀上進(jìn)行以下反應(yīng)：

45 ℃ 15 min，95 ℃ 1min；95 ℃ 5 s，60 ℃ 35 s，在每個(gè)循環(huán)第二步（60℃ 35s）收集熒光信號，共

40 個(gè)循環(huán)。（報(bào)告基團(tuán)“FAM”，淬滅基團(tuán)“None”）。