龍眼肉PCR鑒定試劑盒
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上海市奉賢區(qū)
上海滬崢專業(yè)生產(chǎn)銷售龍眼肉PCR鑒定試劑盒現(xiàn)貨,
本試劑盒引物經(jīng)過優(yōu)化,反應(yīng)特異性強,即開即用,歡迎新老客戶咨詢訂購。,本試劑盒引物經(jīng)過優(yōu)化,反應(yīng)特異性強,即開即用,歡迎新老客戶咨詢訂購。
產(chǎn)品詳細信息
中文名稱:龍眼肉PCR鑒定試劑盒
英文名稱:Arillus longan
產(chǎn)品規(guī)格:50T/盒
用途】用于龍眼肉的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5次,有效期12個月。
提示:本品僅用于科研實驗,不能用作醫(yī)療及臨床診斷。
龍眼肉PCR鑒定試劑盒使用方法
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
組織樣品:每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;液體樣品,直接取100μL提取
1.2 DNA提取
1) DNA的提取也可以采用(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
2. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
3. PCR擴增(核酸擴增區(qū))
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL;
熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
4. 結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置Baseline和Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold的Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
5.2 結(jié)果判斷
陽性:檢測通道Ct值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;
可疑:檢測通道35<Ct值≤38,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為35<Ct值≤38,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
5. 質(zhì)控標準
陰性質(zhì)控品:Ct>38或無Ct值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且Ct值≤32;
以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。
6. 檢測方法的局限性
? 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);
? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
? 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
? 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
? 不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
? 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果;
? 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
龍眼肉PCR鑒定試劑盒
◆ 注意事項
1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區(qū)操作。
1)*區(qū):樣本制備區(qū)。<