上海一研生物科技有限公司
主營產品: 生化試劑 ELISA試劑盒, 檢測試劑盒, 免疫組化試劑盒, 分子生物學試劑盒
梨孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒進口試劑
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貿易商,
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上海市閔行區(qū)
注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
保存方式
冰袋運輸。-20℃避光儲存,有效期一年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
梨孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒進口試劑 | Fusarium poae | EY01P2045 |
服務流程:
1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針(染料法只需設計引物)
2、抽提DNA、RNA,并對RNA進行逆轉錄
3、實時熒光定量PCR
4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)
5、返還樣品(引物、RNA和cDNA)
RNA質量檢測:
梨孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒進口試劑1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。具體計算如下:
RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495的TE中,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 l,剩余RNA總量為:
35 l × 0.84 gl = 29.4 g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS電泳緩沖液
濃度 成分
0.4M MOPS,pH 7.0
0.1M 乙酸鈉
0.01M EDTA
灌制凝膠板,預留加樣孔至少可以加入25 l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內,加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。
樣品RNA的抽提
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
以下是公司正在促銷打折產品:
人干擾素可誘導蛋白AIM2 Polyclonal Antibody英文名稱: Tetrahydrofuran CAS: 分子式:C4H8O 分子量:72.11
人金屬肽酶含血小板反應蛋白5(ADAM-TS 5)Polyclonal Antibody英文名稱: Triethylene glycol CAS:112-27-6 分子式:C6H14O4 分子量:150.17
人δ氨基乙酰丙酸脫水酶(ALAD)Polyclonal Antibody英文名稱: Ethylene glycol CAS:107-21-1 分子式:C2H6O2 分子量:62.07
人生成素樣蛋白4(ANGPTL4)Polyclonal Antibody英文名稱: Acetic acid CAS: 分子式:C2H4O2 分子量:60.05
人金屬肽酶含血小板反應蛋白9(ADAMTS9) Polyclonal Antibody英文名稱: Formamide CAS:75-12-7 分子式:CH3NO 分子量:45.04
人乙醛脫氫酶2(ALDH2)Polyclonal Antibody英文名稱: Isopropanol CAS: 分子式:C3H8O 分子量:60.01
人水通道蛋白4(AQP-4)Polyclonal Antibody
人水通道蛋白5(AQP-5)Polyclonal Antibody英文名稱: 4-Aminoazobenzene CAS:60-09-3 分子式:C12H11N3 分子量:197.24
人水通道蛋白1(AQP-1)Polyclonal Antibody英文名稱: Naringin CAS:10236-47-2 分子式:C27H32O14 分子量:580.53
人腺苷蛋氨酸脫羧酶(AMD1)Polyclonal Antibody英文名稱: Capsaicin CAS:404-86-4 分子式:C18H27NO3 分子量:305.41
CAS No.:71700-15-7
中文名:
別名:
分子式:C20H17NO7
性狀:Yellow powder
純度:96.5%
梨孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒進口試劑鹽酸伐昔洛韋對照品產品CAS:124832-27-5
規(guī)格含量:100mg/支
鹽酸伐昔洛韋對照品
分子式:C13H20N6O4·HCl
分子量:360.80
CAS 號:124832-27-5
用途:本品為鹽酸伐昔洛韋(Valacyclovir hydrochloride),按C13H20N6O4·HCl計,供HPLC法測定,含量為95.0%;供UV法測定,含量為96.2%。
包裝及裝量:棕色安瓿瓶裝,每支約 100 毫克。
保存條件:密封,置陰涼處保存。